Padronização de três ELISAs polivalentes com lipopolissacarídeos de cadeia longa dos sorotipos 1 e 5, 2, 3 e 7 ou 10 e 12 de Actinobacillus pleuropneumoniae / Standardization of three polyvalent ELISA based on long chain lipopolysaccharides of serotypes 1 and 5, 2, 3 and 7, or 10 and 12 of Actinobacillus pleuropneumoniae

Três ELISAs polivalentes baseados em lipopolissacarídeos de cadeia longa (LPS-CL) foram estabelecidos para detectar anticorpos para todos os sorotipos prevalentes de Actinobacillus pleuropneumoniae. Foram testadas amostras provenientes do banco de soros de suínos experimentalmente inoculados com todos os sorotipos de A. pleuropneumoniae. Os ELISAs foram sensíveis à detecção de anticorpos contra todos os LPS-CL. Foram observadas reações cruzadas no ELISA polivalente produzido com os sorotipos 1 e 5, com anti-soros específicos para os sorotipos 9 e 11, pois os sorotipos 1, 9 e 11 apresentaram antígenos somáticos comuns. No polivalente com os sorotipos 2, 3 e 7, observaram-se reações com anti-soros dos sorotipos 4, 6 e 8, devido à presença de antígenos somáticos entre os sorotipos 3, 6 e 8 e entre os sorotipos 4 e 7. Amostras de soros de animais infectados com Mycoplasma hyopneumoniae, Mycoplasma flocculare e Haemophilus parasuis, agentes que acometem o sistema respiratório dos suínos, não apresentaram reações cruzadas com os antígenos baseados em LPS-CL.

Three polyvalent ELISA based on long chain lipopolysaccharides (LC-LPS) were established to detect all prevalent serotypes of Actinobacillus pleuropneumoniae. Samples from a serum bank of experimentally inoculated animals with all serotypes of A. pleuropneumoniae were tested. Antibodies specific to LC-LPS of each serotype were detected. Cross-reactions were observed in the polyvalent ELISA produced with serotypes 1 and 5, with specific antisera to serotypes 9 and 11 due to common somatic antigens presence in serotypes 1, 9, and 11. In the polyvalent with serotypes 2, 3 and 7 reactions were observed with antisera of serotypes 4, 6, and 8, due to the presence of somatic antigens in serotypes 3, 6, and 8 and serotypes 4 and 7. Experimentally infected animals with respiratory agents of swine Mycoplasma hyopneumoniae, Mycoplasma flocculare, and Haemophilus parasuis did not present cross-reactions with the antigens based on LC-LPS.

Avaliaçäo de testes de ELISA para diagnóstico sorológico de infecçöes pelos sorotipos 3, 5 e 7 de Actinobacillus pleuropneumoniae em suínos / Evaluation of ELISAs for the diagnosis of Actinobacillus pleuropneumoniae infections serotypes 3, 5 e 7 in pigs

Compararam-se dois antígenos no teste de ELISA para o diagnóstico sorológico dos sorotipos 3, 5 e 7 de A. pleuropneumoniae prevalentes no Brasil. Um compunha-se de da fase aquosa da extraçäo fenólica de suspensäo bacteriana (FAF) e o outro de lipopolissacarídeos de cadeia longa (LPS-CL). Com esses antígenos foram padronizados ELISAs monovalente e polivalente para os sorotipos prevalentes no Brasil. Com os resultados dos testes de um conjunto de amostras de soro de suínos livres de infecçäo para A. pleuropneumoniae e um conjunto de amostras de soro obtidas de leitöes inoculados com os sorotipos citados e que apresentaram soroconversäo, determinaram-se as equaçöes discriminantes para os conjuntos de soros e compararam-se os testes quanto à distância generalizada de Mahalanobis, ao coeficiente de determinaçäo, ao teste F, ao coeficiente global, à sensibilidade e à especifidade. Na análise desses parâmetros observou-se que o antígeno FAF foi superior. Com o ELISA PFAF reaçöes positivas näo esperadas foram observadas com animais inoculados com os sorotipos heterólogos 2 e 9, näo observadas com o PLPS-CL. A sensibilidade dos testes polivalentes ficou entre 91,5 e 95,7 por cento com especifidade similar, indicando que ambos os testes säo adequados para triagem sorológica uma vez que detectam os sorotipos 3, 4, 5, 6, 7 e 8

Estimativa dos índices de pneumonia, pela tosse, e de rinite atrófica, por espirros, em suínos / Estimating of pneumonia by coughing and atrophic rhinitis by sneezing indices in swine

Realizou-se um estudo em 64 granjas de suínos na regiäo sul do Brasil entre julho de 1995 e março de 1997 com o objetivo de estimar o índice de pneumonia (IP) e o índice de rinite atrófica (IRA), por meio da contagem dos sinais clínicos de tosse e espirro, respectivamente, em suínos em crescimento-terminaçäo. Em cada granja, um lote com cerca de 60 suínos foi acompanhado desde o alojamento na fase de crescimento até o abate. Tosse e espirro foram contados em quatro oportunidades (30, 50 e 80 dias após o alojamento e 1 a 3 dias antes do abate). Em cada oportunidade foram feitas três contagens de dois minutos cada e o percentual de tosse e espirro para cada lote foi calculado pela média das três contagens em relaçäo ao tamanho do lote. No abate, os suínos foram avaliados quanto à frequência e severidade de lesöes de hepatizaçäo pulmonar e de rinite atrófica nos cornetos nasais para cálculo do IP e do IRA, respectivamente. Os dados foram submetidos às análises de correlaçäo de Pearson e de regressäo simples para ajuste da equaçäo de prediçäo do IP em relaçäo à porcentagem de tosse e do IRA em relaçäo à porcentagem de espirro. As equaçöes obtidas foram: IPe=0,35 + (o,11 x porcentagem de tosse) com R ao quadrado=0,45 e IRAe=0,36 + (0,065 x porcentagem de espirro) com R ao quadrado=0,36. Conclui-se que é possível utilizar o método de contagem de tosse e espirro na fase de crescimento-terminaçäo para estimar, respectivamente, o IP e o IRA

Comparaçäo de métodos de isolamento de bactérias NAD-dependentes do trato respiratório superior de suínos sadios / Methods to isolate NAD-dependent bacteria from the upper respiratory tract of health pigs

Secreçöes nasais, tonsilares e tecido tonsilar foram coletados de 67 leitöes de 9 a 15 semanas de idade, provenientes de três rebanhos positivos para Actinobacillus pleuropneumoniae (App), e de 50 leitöes provenientes de dois rebanhos, negativos. Foram classificados como positivos aqueles rebanhos com isolamento prévio de sorotipos 3, 5 e 7 e rebanhos negativos aqueles submetidos a controle veterinário, sem notificaçäo de sintomas clínicos, lesöes de pleuropneumonia suína e sem isolamento do agente. O material coletado foi submetido a três diferentes métodos de cultivo: 1- semeadura direta em meio de cultivo sólido seletivo; 2- diluiçäo em caldo seletivo seguido de subsemeadura em meio de cultivo sólido seletivo; 3- diluiçäo em caldo seletivo seguido de subsemeadura em ágar sangue. Entre as amostras NAD-dependentes recuperadas 86 foram classificadas como App, 13 como grupo minor e 21 como grupo taxon (C, D, E e F). Dos rebanhos positivos foram recuperadas quatro amostras de App (sorotipos 3, 7 e 12) e 51 näo sorotipificáveis. Dos rebanhos negativos foram recuperadas 31 amostras de App näo sorotipificáveis, indicando que o App faz parte da flora normal do trato respiratório superior dos suínos. O melhor método de isolamento de amostras NAD-dependentes de leitöes portadores foi da biópsia de tecido tonsilar semeado diretamente em meio sólido seletivo (PPLO ágar adicionado de 2 mica grama de cristal violeta, 10 mica grama NAD, 1 mica grama de lincomicina, 1,4 mica grama de bacitracina por ml)

Utilizaçäo de um teste de ELISA polivalente para detecçäo de anticorpos contra Actinobacillus pleuropneumoniae (App) / Utilization of a polyvalent ELISA test for detection antibodies against of Actinobacillus pleuropneumoniae

Um teste de ELISA polivalente baseado em lipopolissacarídeos de cadeia longa (LPS - CL) de Actinobacillus pleuropneumoniae (App) sorotipos 3, 5 e 7 foi avaliado testando-se amostras do soro de leitöes e matrizes provenientes de 10 rebanhos positivos e de 10 rebanhos negativos. Foram classificados como positivos aqueles rebanhos com isolamento prévio do App sorotipos 3, 5 ou 7 e rebanhos negativos aqueles submetidos ao controle veterinário, sem notificaçäo de sintomas clínicos, sem lesöes de pleuropneumonia suína e sem isolamento do agente. Todos os rebanhos positivos apresentaram sorologia positiva e as matrizes apresentaram maior número de soroconversores (P<0,05) do que os leitöes. Entre os rebanhos negativos quatro apresentaram sorologia negativa, cinco sorologia positiva com valores preditivos altos (96 a 99 por cento) e um com valor preditivo considerado baixo (56 por cento). O teste apresentou 100 por cento de sensibilidade e aparentemente baixa especificidade, porém, como detectou os sorotipos prevalentes no Brasil e sorotipos que possuem LPS - CL homólogos (3, 4, 5, 6, 7 e 8), ele é aplicável somente como teste de triagem

Efeito de óxido de zinco no controle da diarréia pós-desmame em leitöes infectados experimentalmente com Escherichia coli / Effects of zinc oxide on postweaning diarrhea control in pigs experimentally infected with E. coli

Com o objetivo de avaliar a eficiência de diferentes marcas comerciais de ZnO disponíveis no mercado brasileiro, para o controle de diarréia pós-desmame em suínos, bem como de estudar a sua forma de açäo, foram realizados três experimentos. No experimento 1, foram utilizados 36 leitöes desmamados, divididos em seis tratamentos e alimentados à vontade. Nos tratamentos de 2 a 5 foram suplementados com 2400ppm de Zn proveniente de diferentes marcas comerciais de ZnO, (marcas A,B,C e D). Três dias após o início da suplementaçäo, os suínos desses tratamentos foram inoculados, por via oral, com uma cultura de Escherichia coli enteropatogênica. Os suínos do tratamento 1 também foram inoculados com a mesma cepa de E. coli e näo receberam ZnO suplementar. Os suínos do tratamento 6 näo receberam ZnO suplementar e näo foram inoculados. No experimento 2, repetiram-se os tratamentos 1 e 2 do experimento 1 com objetivo de comprovar a eliminaçäo da E. coli nas fezes. No experimento 3, foram testadas in vitro as concentraçöes mínimas inibitórias das quatro marcas comerciais de ZnO, para a amostra de E. coli usada como inóculo. Os resultados mostraram que o ZnO, na dose de 2400ppm de Zn suplementar, independentemente da marca comercial usada, foi eficiente em prevenir a diarréia por E. coli. Os leitöes que foram inoculados e que näo receberam ZnO suplementar apresentaram diarréia mais severa do que aqueles suplementados com ZnO. A eliminaçäo da E. coli nas fezes ocorreu a partir do segundo dia pós-inoculaçäo, tanto nos leitöes suplementados como naqueles näo suplementados com ZnO, indicando que o ZnO näo inibiu a multiplicaçäo da E. coli no intestino. A eliminaçäo de Zn nas fezes dos leitöes suplementados com ZnO foi cerca de 21 vezes maior do que os animais que receberam dieta basal e a quantidade de Zn no fígado foi 1,5 vezes maior que nos animais-controle. A concentraçäo mínima inibitória das quatro marcas comerciais de ZnO foi igual (256mg/ml). A constante excreçäo da E. coli, associada com alta concentraçäo de Zn nas fezes e baixa ocorrência de diarréia, indica que esse mineral näo inibe a multiplicaçäo da bactéria no intestino e sugere a existência de outros mecanismos de açäo do Zn na prevençäo da diarréia

Efeito do processo de cozimento de mortadela e salsichas sobre a sobrevivência do Actinobacillus pleuropneumoniae / Effect of the cooking process of Bolognia and Viena sausages on the survival of Actinobacillus pleuropneumoniae

Sacos de diálise contendo uma amostra de Actinobacillus pleuropneumoniae, suspensa em salina fisiológica ou homogeneizada nas emulsöes de mortadelas e salsichas, foram embutidos junto com a massa de cozimento, no centro, de mortadelas e salsichas. As mortadelas e salsichas foram levadas ao forno de cozimento onde permaneceram na temperatura e tempo de cozimento indicado para cada produto. O cozimento foi fracionado em três tempos. De cada tempo foram removidas quatro amostras de cada produto e quantificado o número de bactérias dentro dos sacos de diálise. O A. pleuropneumoniae näo sobreviveu ao processo de cozimento em ambos os produtos, indicando que carcaças oriundas de suínos acometidos de pleuropneumonia sub-aguda causada pelo agente em questäo podem ser direcionadas para o cozimento, sem risco de contaminaçäo dos consumidores

Caracterizaçäo bioquímica, patológica e da resposta humoral de uma amostra de Actinobacillus pleuropneumoniae sorotipo 3, isolada no Brasil / Biochemical and pathological characterization and humoral response of an Actinobacillus pleuropneumoniae strain, sorotype 3, isolated in Brazil

Foi isolada uma amostra de A. pleuropneumoniae sorotipo 3, de suínos originados de um sistema de criaçäo de multiplicaçäo de material genético melhorado. Esta amostra é fracamente hemolítica para hemáceas de cavalo em ágar sangue, fermentadora da rafinose e "CAMP-test" negativa. Foi isolada de pequenos abscessos disseminados pelo parênquima pulmonar e, quando inoculada em animais SPF, induziu lesöes clássicas de pleuropneumonia suína e näo induziu anticorpos neutralizantes da hemólise para as citolisinas I e II

Capacidade hemaglutinante de amostras de Pasteurella multocida isoladas de suínos e sua associaçäo com fímbria e dermotoxicidade / Haemagglutinating capability of Pasteurella multocida strains isolated from swine and their association with fimbriae and dermotoxicity

Estudaram-se 76 amostras de P. multocida (Pm), 70 isoladas das cavidades nasais de leitöes afetados com rinite atrófica e seis isoladas de pulmöes, provenientes de 16 propriedades no Sul do Brasil. Amostras de Pm do tipo D e toxigênicas foram isoladas em 10 das 16 propriedades. O tipo capsular D foi prevalente na cavidade nasal (77 por cento das amostras), enquanto que nos pulmöes prevaleceu o tipo A (83 por cento). Todas as amostras toxigênicas isoladas de cavidade nasal (55 por cento) pertenciam ao tipo D e uma, isolada do pulmäo, ao tipo A. Nove padröes de hemaglutinaçäo (HA) foram identificados com as hemácias de suíno, coelho, cobaio, ovelha e galinha. Cinquenta e nove por cento das amostras toxigênicas e do tipo D aglutinavam todas as hemácias citadas (padräo I). O meio de Minca com 10 por cento de soro bovino propiciou os títulos HA mais elevados. Näo se detectou efeito da temperatura de cultivo nos títulos de HA e näo se observou associaçäo entre HA, dermotoxicidade e fimbria

Reproduçäo experimental da rinite atrófica com Pasteurella multocida em leitöes tratados com ácido acético ou inoculados com Bordetella bronchiseptica / Experimental reproduction of atrophic rhinitis with Pasteurella multocida in piglets treated with acetic acid or inoculated with Bordetella bronchiseptica

Avaliou-se a capacidade de diferentes amostras de P. multocida toxigênicas do tipo D, após tratamento da mucosa nasal com ácido acético, em colonizar a cavidade nasal e induzir rinite atrófica (RA) em leitöes, associadas ou näo com B. bronchiseptica. P. multocida foi reisolada mais frequentemente da cavidade nasal dos animais inoculados com B. bronchiseptica do que daqueles tratados com ácido acético. Duas amostras de P. multocida (4735 e 4776) induziram RA grave somente nos leitöes tratados com ácido acético ou inoculados previamente com B. bronchiseptica toxigênica em fase I. A amostra 3497 de P. multocida somente induziu RA grave nos leitöes tratados com ácido acético e quando associada a amostra 4963 de B. bronchiseptica em fase I e toxigênica, sendo reisolada em maior número e com maior frequência das cavidades nasais que as demais amostras de B. bronchiseptica. Existem diferenças entre amostras toxigênicas de P. multocida quanto à capacidade de colonizar a cavidade nasal e induzir RA grave em leitöes

Associaçäo de Pasteurella multocida toxigênica do tipo D ao trato respiratório superior dos suínos / Association of toxigenic type D Pasteurella multocida to the upper respiratory tract of swine

Objetivou-se determinar se associaçäo poderia ser o mecanismo pelo qual P. multocida integra-se com a mucosa nasal dos leitöes. Cortes criostáticos de anéis de traquéias inoculadas com amostra toxigênica de P. multocida do tipo D e de secçöes de tecido amigdalino, fixados em formalina e embebidos em parafina, de leitöes SPF de cinco a oito semanas de idade, inoculados como amostra toxigênica de P. multocida, foram submetidos às técnicas de imunoperoxidase (IP) para detectar P. multocida. Os números de Bordetella bronchiseptica e P. multocida nas secreçöes nasais e amígdalas, de 85 leitöes, foram estimados à necropsia. Os leitöes foram inoculados com amostra toxigênica de P. multocida do tipo D, após terem sido inoculados com B. bronchiseptica ou após terem suas cavidades nasais tratados por ácido acético. P. multocida foi recuperada das amígdalas de 47 (72 por cento) e das secreçöes nasais de 13 (20 por cento) animais inoculados, sendo o número de bactérias recuperado das amígdalas superior (P<0,005) ao das secreçöes nasais. Maior número de B. bronchiseptica foi isolado das secreçöes nasais. P. multocida associou-se ao muco presente no lúmen dos anéis e aderiu pobremente às células mucosas, e foi encontrada dentro das criptas das amígdalas sem invadir o parênquima glandular e sem aderir ao epitélio

Vacinaçäo com Bordetella bronchiseptica e Pasteurella multocida, associada a alteraçöes do manejo, no controle da rinite atrófica dos suínos / Use of a Bordetella bronchiseptica-Pasteurella multocida vaccine in addition to improved management, to control swine atrophic rhinitis

Empregou-se uma vacina preparada com B. bronchiseptica e P. multocida tipo D, toxigênica, para controlar a rinite atrófica em rebanho de 220 matrizes suínas. Aproximadamente 60 por cento dos animais em idade de abate exibiam sinais clínicos da doença antes da vacinaçäo. Lesöes das conchas nasais foram observadas em 70 por cento (56/80) dos animais antes do período experimental e em 77 por cento (55/71) dos näo vacinados, examinados ao final do experimento. O rebanho foi acompanhado durante 12 meses antes e 22 meses após o início da vacinaçäo. Realizaram-se alteraçöes no manejo, reduçäo do plantel de 220 para 180 matrizes e mudanças no esquema de limpeza, desinfecçäo e ocupaçäo dos prédios. As medidas adotadas eliminaram a doença clínica dos leitöes jovens e reduziram (P<0,001) as alteraçöes das conchas nasais, observadas em apenas 15 por cento (39/266) dos leitöes vacinados, a ocorrência de pneumonias e pleuropneumonias, de 22 por cento para 9 por cento dos animais necropsiados e o número de condenados no frigorífico, 11 por cento para 0,8 por cento

Ocorrência de fímbria em amostras toxigênicas de Pasteurella multocida do tipo D isoladas de suínos e tentativas de estabilizar sua expressäo / Occurrence of fimbriae in toxin-producing type D Pasteurella multocida isolated from pigs and attempts to stabilize its expression

Pesquisou-se em amostras toxigênicas de P. multocida (tipo D) a presença de fímbrias e analisaram-se algumas possíveis condiçöes para sua expressäo com o intuito de caracterizar esta estrutura como uma possível adesina. Amostras de P. multocida com certos títulos hemaglutinantes elevados, com poucas passagens em meios de cultivos após isolamento de animais inoculados, formaçäo de películas em meios líquidos e variaçöes fenotípicas introduzidas por alfa, alfa, dypiridil (DIB) foram cultivadas em agar sangue (AS), caldo BHI, Minca suplementado com 10 por cento de soro bovino, com e sem agar, caldo de infusäo de conchas nasais e pulmöes, meio de Heddlestone, meio básico com hemina (0,5 a 30 ug/ml) e em AS com 70uM de DIB. Fímbrias foram observadas, à microscopia eletrônica, de forma instável e somente em amostras recém isoladas de suínos, cultivadas em AS. Näo houve aumento da produçäo de fímbria quando as bactérias foram cultivadas nas demais condiçöes testadas

Capacidade adesiva de amostras toxigênicas de Pasteurella multocida do tipo D em células HeLa, HEp-2 e de conchas nasais de suínos / Adhesive capability of toxigenic type D Pasteurella multocida strains in HeLa, HEp-2 and pig nasal turbinate cells

Três amostras toxigênicas de Pasteurella multocida foram submetidas a testes de aderência "in vitro", utilizando-se linhagens de células HeLa, HEp-2 e preparados de células de conchas nasais de suínos (CCNS). Para o teste de adesäo em CCNS, as amostras foram cultivadas em caldo infuso de cérebro e coraçäo, Agar Sangue (AS), meio de Minca com soro bovino e no meio de Heddlestone, com e sem alfa, alfa, dypiridil. Amostras de P. multocida (tipo D) näo aderiram em cultivos de células HeLa e HEp-2. Nos testes de aderência de P. multocida com CCNS, verificou-se que 80 por cento das células ciliadas continham menos do que três bactérias aderidas aos cílios ou ao corpo celular. Entre as células näo ciliadas, este número foi de 5 por cento. As amostras de Pasteurella multocida näo diferiram entre si e nem com relaçäo à E. coli-K12 (controle negativo) na capacidade adesiva. Pelos testes realizados "in vitro", concluiu-se que Pasteurella multocida possui pouca afinidade para as células testadas nas condiçöes discriminadas

Lesions induced in the nasal turbinates of 25 to 35 day-old-piglets challenged with Pasteurella multocida and/or Bordetella bronchiseptica

Leitöes SPF (Specific Pathogen Free), com 25 a 35 dias de idade, foram inoculados com amostras de Pasteurella multocida tipo A ou D e/ou Bordetella bronchiseptica. Ambas amostras de P. multocida em infecçäo simples näo colonizaram persistentemente a cavidade nasal, nem induziram rinite atrófica (RA) progressiva, enquanto a amostra de B. bronchiseptica colonizou e persistiu na cavidade nasal e induziu lesöes moderadas de RA. Os leitöes inoculados com B. bronchiseptica e com P. multocida tipo D, tiveram colonizaçäo persistente de ambas as espécies e desenvolveram lesöes severas de RA, indicando efeito sinérgico entre elas. Em leitöes inoculados somente com P. multocida tipo D, á única lesäo observada foi leve reduçäo no tamanho das trabéculas e hiperplasia osteoblástica focal, enquanto que naqueles infectados com B. bronchiseptica sozinha ou em associaçäo com a P. multocida tipo D, verificou-se reduçäo na osteogênese, aumento da osteólise oesteoclástica, proliferaçäo de tecido fibroso com reduçäo do tamanho das trabéculas ou substituiçäo por células do mesênquimas